Plasmide CRISPR d'Activation (h) GI24: sc-407831-ACT

VSIR code pour le récepteur immunorégulateur GI24 (également appelé VISTA), une molécule de point de contrôle de la famille B7 principalement exprimée dans les compartiments hématopoïétique et myéloïde, qui module l’activation des lymphocytes T et la tolérance périphérique. GI24 participe à la signalisation de la synapse immunologique et à des voies suppressives qui influencent la production de cytokines, la fonction des cellules présentatrices d’antigène et les niveaux de base d’inflammation au sein des microenvironnements tissulaires. Une expression dérégulée de VSIR a été associée à des phénotypes modifiés d’échappement immunitaire et à des profils d’infiltration immunitaire dans le cancer, ainsi qu’à des réponses inflammatoires aberrantes dans des contextes auto-immuns et infectieux. Par conséquent, VSIR est fréquemment étudié dans des voies régissant l’épuisement des lymphocytes T, l’immunosuppression médiée par les cellules myéloïdes et le dialogue tumeur–système immunitaire.

GI24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VSIR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GI24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VSIR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VSIR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GI24. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VSIR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GI24 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GI24 dans les cellules tumorales présentant une expression de VSIR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.