Plasmide CRISPR d'Activation (h) GH: sc-401171-ACT

Le gène humain **GH2** code l’hormone de croissance (GH), une hormone peptidique d’origine hypophysaire qui régule la croissance somatique postnatale et l’homéostasie métabolique. La signalisation de la GH est médiée principalement par le récepteur de l’hormone de croissance et l’activité en aval de JAK2/STAT5, avec une modulation supplémentaire des voies MAPK et PI3K/AKT afin de coordonner des programmes d’expression génique impliqués dans la synthèse protéique, la lipolyse et l’utilisation du glucose. Par l’induction de composants de l’axe IGF et de régulateurs métaboliques, l’activité de GH2 influence la croissance tissulaire, la répartition des nutriments et les circuits de rétrocontrôle endocrinien. Une biologie de la GH dérégulée est impliquée dans des troubles de la croissance et de la composition corporelle et fait fréquemment l’objet d’études dans des modèles de recherche endocrinienne, métabolique et du développement.

GH-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GH-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GH-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GH-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GH-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.