Gemin2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403867-ACT

O gene humano **GEMIN2** codifica a proteína **Gemin2**, um componente central do complexo **SMN–Gemin**, que coordena a montagem de pequenas ribonucleoproteínas nucleares da classe Sm (**snRNPs**) necessárias para a biogénese do espliceossoma e para o splicing do pré‑mRNA. Por meio de interações diretas com proteínas Sm e com a SMN, a Gemin2 ajuda a controlar a maturação de snRNA, o controlo de qualidade das snRNPs e programas mais amplos de metabolismo de RNA que influenciam a integridade do transcriptoma. A disrupção da função do complexo SMN e da montagem de snRNPs está mecanisticamente ligada à neurodegeneração e à biologia dos neurónios motores, e o GEMIN2 tem sido investigado no contexto de defeitos no processamento de RNA e de respostas ao stress celular. A perturbação de GEMIN2 também é usada para estudar como a homeostase do espliceossoma remodela redes de expressão génica relevantes para proliferação e diferenciação.

Gemin2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GEMIN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gemin2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GEMIN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GEMIN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gemin2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GEMIN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gemin2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gemin2 em células tumorais com expressão de GEMIN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.