Plásmido Doble Nickase (h) GDF-15: sc-401430-NIC

El factor de diferenciación del crecimiento 15 (GDF15; GDF-15) es una citocina secretada y sensible al estrés de la superfamilia TGF-β, cuya expresión aumenta ante disfunción mitocondrial, señales inflamatorias y daño celular. Modula el equilibrio energético sistémico y la adaptación tisular al estrés, y se utiliza con frecuencia como indicador de respuestas integradas al estrés que involucran vías como la señalización de p53, la inflamación mediada por NF-κB y programas transcripcionales vinculados a SMAD. En biología humana, la alteración de la expresión de GDF-15 se asocia con remodelación cardiometabólica, inflamación crónica e interacciones tumor–huésped, lo que refleja funciones en la regulación inmunitaria, el metabolismo y la supervivencia celular. La perturbación experimental de GDF15 respalda estudios mecanísticos de la señalización del estrés, el crosstalk entre citocinas y efectos dependientes del contexto sobre la proliferación y la apoptosis.

GDF-15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GDF15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GDF15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GDF15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GDF15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.