Plasmide CRISPR d'Activation (h) GDF-15: sc-401430-ACT

Le facteur de différenciation et de croissance 15 (GDF15) code GDF-15, une cytokine sécrétée sensible au stress appartenant à la superfamille du TGF-β, induite par une dysfonction mitochondriale, l’hypoxie et des signaux inflammatoires. GDF-15 influence des programmes d’adaptation cellulaire, notamment les réponses intégrées au stress, le remodelage métabolique et la régulation de l’activité des cellules immunitaires, avec des effets en aval sur l’apoptose, la prolifération et la réparation tissulaire. Une expression altérée de GDF-15 a été associée à des troubles cardiométaboliques, à la signalisation de stress liée au cancer, à la neuro-inflammation et à des états inflammatoires systémiques, ce qui en fait un point d’entrée utile pour l’exploration des voies de signalisation. En tant que facteur circulant, il est également utilisé pour étudier la communication intercellulaire entre des tissus malades et des compartiments immunitaires ou stromaux.

GDF-15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GDF15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GDF-15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GDF15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GDF15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GDF-15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GDF15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GDF-15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GDF-15 dans les cellules tumorales présentant une expression de GDF15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.