Plasmide Double Nickase (h) GDAP1: sc-412270-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GDAP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GDAP1 Double Nickase (h) et le plasmide GDAP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GDAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) GDAP1 | sc-412270-NIC | 20 µg | $410.00 |
GDAP1 (ganglioside-induced differentiation-associated protein 1) est une protéine de la membrane externe des mitochondries, particulièrement abondante dans les neurones, et impliquée dans le maintien de la morphologie et de la répartition des mitochondries ainsi que de l’homéostasie rédox. Elle intervient dans des voies qui contrôlent la dynamique mitochondriale et le contrôle qualité, notamment des processus liés à l’équilibre fission–fusion, au transport axonal des mitochondries et aux réponses cellulaires au stress oxydatif. Une altération de la fonction de GDAP1 est fortement associée aux neuropathies périphériques héréditaires, en particulier à certains sous-types de la maladie de Charcot–Marie–Tooth, où le stress bioénergétique neuronal et des défauts de trafic mitochondrial constituent des mécanismes majeurs. GDAP1 est donc fréquemment étudiée dans le cadre de la biologie mitochondriale liée à la neurodégénérescence et au maintien des axones.
GDAP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GDAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GDAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GDAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GDAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.