Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCP2 (h): sc-404751

Présentation

TUBGCP2 code la protéine 2 du complexe de la γ‑tubuline (GCP2), un composant central du complexe en anneau de la γ‑tubuline (γTuRC) qui nucléé les microtubules au niveau des centrosomes et d’autres centres organisateurs des microtubules. GCP2 contribue à l’assemblage du fuseau mitotique, à la maturation du centrosome et au maintien de la polarité des microtubules, influençant ainsi la progression du cycle cellulaire et la ségrégation des chromosomes. Par son rôle dans l’intégrité du centrosome et du fuseau, une altération de la fonction de TUBGCP2 est pertinente pour des voies associées à l’instabilité génomique et à des phénotypes prolifératifs. La perturbation des composants du γTuRC est fréquemment étudiée dans le contexte d’anomalies des centrosomes, d’aneuploïdie et de défauts du cytosquelette observés dans de multiples états cellulaires liés à des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBGCP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBGCP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBGCP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBGCP2 pour l'étude de la signalisation de GCP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBGCP2 essentiels à la fonction de GCP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBGCP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GCP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBGCP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCP2 plasmide HDR (h) et le GCP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBGCP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBGCP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.