GCN5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400767-ACT

Das humane KAT2A-Gen kodiert GCN5, eine Lysin-Acetyltransferase, die die Acetylierung von Histon H3 (einschließlich H3K9 und H3K14) katalysiert und dadurch offenes Chromatin sowie Transkriptionskompetenz fördert. GCN5 wirkt in multisubunitären Koaktivator-Komplexen wie SAGA und ATAC und koppelt Histonacetylierung mit Programmen der Transkriptionsinitiation und -elongation, die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und linienspezifische Genexpression regulieren. Durch die Acetylierung von Histon- und Nicht-Histon-Substraten integriert KAT2A Signalinputs in eine chromatinbasierte Kontrolle von Proliferation und Differenzierung. Eine veränderte KAT2A/GCN5-Aktivität und die damit verbundene epigenetische Fehlregulation werden mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken und weiteren Erkrankungen in Verbindung gebracht, die auf abnormes Chromatin-Remodeling zurückzuführen sind.

GCN5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KAT2A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GCN5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KAT2A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KAT2A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GCN5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KAT2A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GCN5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GCN5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KAT2A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.