Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCN1L1 (h): sc-411545

Présentation

GCN1 (codant pour GCN1L1) est un cofacteur conservé de la réponse intégrée au stress (ISR) qui soutient le contrôle de la traduction dépendant de la détection des acides aminés via l’axe GCN2–eIF2α. En facilitant l’activation des kinases d’eIF2α en condition de limitation nutritionnelle et de stress associé aux ribosomes, GCN1L1 contribue à une atténuation globale de la traduction et à l’induction sélective de programmes d’adaptation au stress, tels que la transcription dépendante d’ATF4. Cette régulation relie GCN1L1 à la protéostasie, aux réponses au stress oxydatif et mitochondrial, ainsi qu’à une homéostasie métabolique plus large. La dérégulation de la signalisation du stress translationnel et des voies de réponse aux nutriments dans lesquelles GCN1L1 intervient a été associée à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer, la neurodégénérescence et les états inflammatoires, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCN1L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GCN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GCN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GCN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCN1L1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GCN1 pour l'étude de la signalisation de GCN1L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GCN1 essentiels à la fonction de GCN1L1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GCN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCN1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GCN1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GCN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCN1L1 plasmide HDR (h) et le GCN1L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GCN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GCN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.