Plasmide CRISPR d'Activation (m) GATA4: sc-420496-ACT

Le gène murin Gata4 code GATA4, un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie aux motifs GATA afin de réguler des programmes géniques contrôlant la cardiogenèse, la spécification de l’endoderme et la différenciation de multiples lignages mésodermiques et viscéraux. Il s’intègre aux voies de développement essentielles et à leurs cofacteurs, notamment NKX2-5, TBX5, les protéines FOG et la signalisation BMP/TGF-β, pour coordonner des réseaux transcriptionnels gouvernant le destin cellulaire et la morphogenèse tissulaire. Dans les tissus adultes, GATA4 contribue à l’homéostasie cardiaque et au remodelage induit par le stress, avec des effets en aval sur l’expression des gènes sarcomériques, la fonction mitochondriale et les voies de survie cellulaire. Une activité dérégulée de GATA4 est associée à des cardiopathies congénitales et a été impliquée dans une reprogrammation transcriptionnelle plus large, liée au développement et à certaines maladies, pertinente pour la recherche cardiovasculaire et gastro-intestinale.

GATA4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gata4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATA4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gata4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gata4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATA4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gata4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATA4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATA4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gata4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.