Plasmide CRISPR d'Activation (m) GATA3: sc-420495-ACT

Le gène murin **Gata3** code le facteur de transcription **GATA3**, une protéine à doigt de zinc se liant à l’ADN, qui orchestre la spécification de lignage et la différenciation dans de nombreux tissus. Dans le système immunitaire, GATA3 est un régulateur central du développement des lymphocytes T et de la polarisation Th2, en coordonnant l’expression des gènes de cytokines et le remodelage de la chromatine afin d’orienter les choix de destin cellulaire. Il contribue aussi aux réseaux transcriptionnels épithéliaux et du développement en intégrant des signaux en états d’expression génique stables. Une activité dérégulée de GATA3 a été associée à des altérations de l’homéostasie immunitaire et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans des contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la différenciation, de l’inflammation et du contrôle transcriptionnel.

GATA3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gata3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATA3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gata3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gata3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATA3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gata3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATA3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATA3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gata3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.