Gastrin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403220-ACT

Das menschliche GAST-Gen kodiert Gastrin, ein Peptidhormon, das hauptsächlich von G-Zellen des Magens produziert wird und die Magensäuresekretion, das Wachstum der Schleimhaut sowie die gastrointestinale Motilität reguliert. Gastrin signalisiert vor allem über den Cholezystokinin-B-Rezeptor (CCKBR) und aktiviert intrazelluläre Signalwege wie PLC/PKC, MAPK/ERK sowie calciumabhängige Signalübertragung, um epitheliale Proliferation und sekretorische Programme zu modulieren. Eine dysregulierte Gastrinexpression und veränderte Gastrin–CCKBR-Signalgebung wurden mit einem hypergastrinämieassoziierten Umbau der Magenschleimhaut und weiterreichenden Störungen der endokrinen Homöostase des Verdauungssystems in Verbindung gebracht. Als Marker und Regulator der gastrischen endokrinen Funktion wird GAST häufig in Modellen der Magenphysiologie, der entzündungsassoziierten Signalgebung und der epithelialen Differenzierung untersucht.

Gastrin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GAST-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gastrin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GAST-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GAST-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gastrin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GAST-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gastrin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gastrin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GAST-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.