Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gas6 (m): sc-420490

Présentation

Growth arrest–specific 6 (Gas6) est un ligand sécrété dépendant de la vitamine K qui se lie aux récepteurs tyrosine kinases de la famille TAM, principalement AXL, MERTK et TYRO3, afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération et les réponses migratoires. Via la signalisation TAM, Gas6 influence en aval les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et NF-κB, et favorise l’élimination des cellules apoptotiques grâce à une reconnaissance dépendante de la phosphatidylsérine. Dans les modèles murins, Gas6 est impliqué dans l’homéostasie de l’immunité innée, l’efferocytose des macrophages et la modulation du tonus inflammatoire, avec des implications pour des processus tels que la fibrose, la thrombose et les interactions tumeur–système immunitaire au sein du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gas6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gas6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gas6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gas6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gas6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gas6 pour l'étude de la signalisation de Gas6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gas6 essentiels à la fonction de Gas6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gas6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gas6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Gas6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gas6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gas6 plasmide HDR (m) et le Gas6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gas6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gas6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.