GALR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403779-ACT

O gene humano **GALR2** codifica o **recetor de galanina 2 (GALR2)**, um GPCR de classe A que se liga ao neuropéptido galanina para modular a excitabilidade neuronal, a libertação de neurotransmissores e a secreção neuroendócrina. Após a ligação do ligando, o GALR2 acopla-se predominantemente a **Gq/11** para ativar a **PLCβ**, a sinalização **IP3/DAG**, a mobilização intracelular de **Ca2+** e vias dependentes de **PKC**, com acoplamento adicional, dependente do contexto, a outras proteínas G que molda a sinalização **MAPK/ERK** e programas de expressão génica. Estes outputs de sinalização associam o GALR2 à regulação do processamento da dor, de comportamentos relacionados com o humor, da alimentação e do equilíbrio energético, e da contratilidade do músculo liso em tecidos periféricos. A expressão ou sinalização desregulada de GALR2 tem sido investigada em fenótipos neuropsiquiátricos e metabólicos e na biologia tumoral, onde vias impulsionadas por GPCR podem influenciar proliferação, sobrevivência e migração, reforçando o seu valor como sonda de vias em estudos mecanísticos.

GALR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GALR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GALR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GALR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GALR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GALR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GALR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GALR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GALR2 em células tumorais com expressão de GALR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.