Plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-8 (m): sc-424987

Présentation

Le gène murin *Lgals8* code la galectine-8, une lectine à répétitions en tandem se liant aux β-galactosides, qui reconnaît des glycanes portés par des protéines de surface cellulaire et de la matrice extracellulaire afin de réguler l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que la signalisation dépendante des intégrines. La galectine-8 agit comme capteur de dommages en se liant à des glycanes de l’hôte exposés sur des endomembranes rompues, favorisant l’autophagie sélective et coordonnant des réponses immunitaires innées face au stress intracellulaire et aux infections. Par réticulation et signalisation médiées par sa fonction de lectine, elle module les réseaux de cytokines inflammatoires et l’homéostasie cellulaire, en interagissant avec des voies qui contrôlent l’endocytose, la dynamique du cytosquelette et le trafic vésiculaire. Une activité dérégulée de la galectine-8 a été associée à des états inflammatoires altérés, à un remodelage lié à la fibrose et à la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et de la pathologie tissulaire dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lgals8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lgals8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lgals8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine galectin-8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lgals8 pour l'étude de la signalisation de galectin-8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lgals8 essentiels à la fonction de galectin-8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lgals8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le galectin-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le galectin-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lgals8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le galectin-8 plasmide HDR (m) et le galectin-8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lgals8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lgals8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.