Plasmide Double Nickase (h) galectin-4: sc-404255-NIC

LGALS4 code la galectine-4, une lectine liant les β-galactosides, enrichie dans les tissus intestinaux et épithéliaux, qui agit à la surface cellulaire et dans le milieu extracellulaire pour organiser des interactions dépendantes des glycannes. En se liant à des glycoprotéines et des glycolipides spécifiques, la galectine-4 contribue à la polarité épithéliale, à la stabilité des jonctions d’adhérence et des jonctions serrées, ainsi qu’à la modulation de l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice, influençant la migration et l’homéostasie de la barrière. L’activité de la galectine-4 recoupe des processus liés à l’immunité muqueuse et à la signalisation inflammatoire via la régulation de l’agrégation des récepteurs et du trafic endocytaire. Une expression dérégulée de LGALS4 a été associée à des altérations de la différenciation épithéliale et à des contextes de pathologies colorectales, ce qui en fait une cible utile pour disséquer la signalisation médiée par les glycannes et la biologie de la barrière.

galectin-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LGALS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LGALS4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LGALS4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LGALS4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.