Plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-4 (m2): sc-421417-KO-2

Présentation

Lgals4 code la lectine se liant aux β-galactosides galectine‑4, une galectine à répétitions en tandem enrichie dans l’épithélium intestinal, qui s’associe à des protéines membranaires glycosylées et à des glycolipides afin d’organiser des microdomaines apicaux et de réguler les interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice. La galectine‑4 contribue à la différenciation épithéliale, au maintien de la barrière et au trafic des glycoprotéines, et peut moduler la signalisation ainsi que la communication immunitaire via une liaison dépendante des glucides à la surface cellulaire. Dans les tissus murins, une expression altérée de Lgals4 a été associée à des changements de l’inflammation muqueuse et de l’homéostasie épithéliale, ce qui la rend pertinente pour les études de la physiologie intestinale et du remodelage lié à l’inflammation. Son activité lectinique permet également d’explorer les voies dépendantes de la glycosylation qui influencent l’adhésion, la migration et les réponses au stress épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-4 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lgals4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lgals4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lgals4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine galectin-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lgals4 pour l'étude de la signalisation de galectin-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lgals4 essentiels à la fonction de galectin-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lgals4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le galectin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le galectin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lgals4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le galectin-4 plasmide HDR (m) et le galectin-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lgals4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lgals4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.