Plasmide CRISPR d'Activation (h) galectin-4: sc-404255-ACT

Le gène humain **LGALS4** code la galectine‑4, une lectine liant les β‑galactosides, particulièrement abondante dans l’épithélium gastro‑intestinal, qui contribue à la polarité épithéliale, à l’adhérence cellule‑cellule et cellule‑matrice, ainsi qu’à l’organisation de la barrière muqueuse. La galectine‑4 interagit avec des récepteurs glycosylés et des microdomaines membranaires pour moduler le trafic intracellulaire, la signalisation et les programmes de différenciation cellulaire, en lien avec des voies impliquées dans l’inflammation, la communication immuno‑épithéliale et l’homéostasie de l’épithélium. Une expression dérégulée de **LGALS4** a été rapportée dans des troubles gastro‑intestinaux et en biologie tumorale, où des interactions lectine‑glycane altérées peuvent influencer l’invasion, la migration et le contexte immunitaire. En tant que lectine sécrétée et associée à la membrane, la galectine‑4 est également utilisée comme marqueur pour étudier les transitions d’état épithélial et la signalisation dépendante de la glycosylation.

galectin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGALS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGALS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGALS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGALS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGALS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.