Plasmide CRISPR d'Activation (m) galectin-3: sc-421416-ACT

Lgals3 chez la souris code la galectine‑3, une lectine liant les β‑galactosides qui se localise dans le cytoplasme, le noyau, à la surface cellulaire et dans le milieu extracellulaire afin de réguler les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. La galectine‑3 module une signalisation dépendante des glycannes qui influence l’adhérence, la migration, la phagocytose et les réponses cytokiniques inflammatoires, avec des rôles documentés dans l’activation des macrophages et la biologie des fibroblastes. Elle interfère avec des voies contrôlant la résistance à l’apoptose, l’endocytose et la signalisation de l’immunité innée, notamment les réponses déclenchées par les récepteurs de reconnaissance des motifs. Une expression dérégulée de la galectine‑3 est associée au remodelage tissulaire et à la fibrose, aux interactions tumeur–stroma et aux états inflammatoires chroniques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent dans des systèmes modèles liés aux maladies.

galectin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lgals3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lgals3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lgals3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lgals3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lgals3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.