Plasmide CRISPR d'Activation (h) galectin-2: sc-405948-ACT

Le gène humain **LGALS2** code la galectine-2, une lectine liant les **β-galactosides** qui module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice en reconnaissant des motifs glycanes spécifiques sur des protéines membranaires et extracellulaires. La galectine-2 est impliquée dans la régulation de l’activité des cellules immunitaires et de la signalisation inflammatoire, influençant des processus tels que l’adhésion des leucocytes, les réponses de la barrière épithéliale et les réseaux régis par les cytokines. Par sa liaison lectine–glycane, elle peut affecter des voies associées à l’apoptose, à l’activation de l’immunité innée et à l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de **LGALS2** a été associée à des phénotypes liés à l’inflammation et aux maladies cardiovasculaires, ce qui étaye sa pertinence en tant que cible mécanistique dans les études de biologie des maladies.

galectin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGALS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGALS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGALS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGALS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGALS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.