Galanin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402730-ACT

O GAL humano codifica a galanina, um neuropeptídeo secretado que sinaliza por meio de receptores acoplados à proteína G (GALR1–3) para regular a excitabilidade neuronal, a liberação de neurotransmissores e a função neuroendócrina. A galanina modula vias de segundos mensageiros, incluindo cAMP/PKA, MAPK/ERK e sinalização por cálcio, influenciando processos como regulação do apetite, nocicepção, responsividade ao estresse e controle autonômico. No sistema nervoso e em tecidos periféricos, a atividade do GAL contribui para a plasticidade sináptica e a comunicação neuroimune, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de fenótipos neurológicos e metabólicos. Alterações na sinalização da galanina têm sido associadas na literatura a distúrbios envolvendo processamento da dor, regulação do humor, suscetibilidade a convulsões e homeostase energética, sustentando seu uso como um nó de via em modelos relevantes para doenças.

Galanin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GAL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Galanin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GAL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GAL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Galanin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GAL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Galanin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Galanin em células tumorais com expressão de GAL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.