Plásmido CRISPR de Activación (h) Gads: sc-402831-ACT

GRAP2 codifica la proteína adaptadora Gads, un andamiaje de señalización hematopoyética que enlaza LAT fosforilado con SLP-76 para ensamblar el signalosoma del receptor de células T (TCR). A través de sus dominios SH2 y SH3, Gads coordina el reclutamiento de complejos efectores que promueven la activación de PLCγ1, el flujo de calcio, la señalización MAPK y programas transcripcionales posteriores que controlan la activación, diferenciación y producción de citocinas de las células T. La función de GRAP2 también es relevante para la señalización de receptores inmunitarios en otros linajes leucocitarios e influye en la remodelación del citoesqueleto y la formación de la sinapsis inmunológica. La señalización desregulada dependiente de GRAP2/Gads se ha asociado con respuestas inmunitarias alteradas y se estudia en contextos como la inmunodeficiencia, mecanismos relacionados con la autoinmunidad y redes de señalización en neoplasias hematológicas.

Gads El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRAP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gads El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRAP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRAP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gads. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRAP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gads en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gads en células tumorales con expresión de GRAP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.