Plásmido CRISPR de Activación (h) GADD 45β: sc-401286-ACT

GADD45B (GADD45β) es un miembro inducible por estrés de la familia de proteínas inducibles por detención del crecimiento y daño del ADN (GADD45), que integra señales genotóxicas, inflamatorias y metabólicas para modular decisiones sobre el destino celular. Participa en la respuesta al daño del ADN y en la señalización asociada a la reparación, se interconecta con las vías MAPK (incluidas JNK y p38) y con programas regulados por NF-κB, y puede influir en el control del ciclo celular, la apoptosis y la adaptación celular al estrés. En células humanas, la expresión desregulada de GADD45β se ha vinculado a alteraciones en la señalización del estrés y en las respuestas transcripcionales observadas en múltiples contextos patológicos, incluidos la biología del cáncer y patologías asociadas al sistema inmunitario. Estas características hacen de GADD45β un nodo molecular útil para desentrañar la comunicación cruzada entre la señalización por daño del ADN, la inflamación y los programas de supervivencia.

GADD 45β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GADD45B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GADD 45β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GADD45B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GADD45B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GADD 45β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GADD45B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GADD 45β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GADD 45β en células tumorales con expresión de GADD45B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.