Plasmide CRISPR/Cas9 KO GABA_A Rα2 (h): sc-402715

Présentation

GABRA2 code pour la sous-unité α2 du récepteur humain GABA\(_A\), un canal chlorure pentamérique activé par un ligand qui assure une neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central. Les récepteurs contenant GABA\(_A\) Rα2 modulent l’inhibition synaptique, l’excitabilité neuronale et les oscillations des réseaux en couplant la liaison du GABA au flux de chlorure et à l’hyperpolarisation membranaire. Cette sous-unité contribue à l’assemblage du récepteur, à son trafic intracellulaire et à sa localisation synaptique, en s’intégrant à des processus de signalisation qui régulent l’homéostasie ionique et la plasticité dépendante de l’activité. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de GABRA2 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et liés aux crises, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques du dysfonctionnement des circuits inhibiteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rα2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GABRA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GABRA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GABRA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GABAA Rα2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GABRA2 pour l'étude de la signalisation de GABAA Rα2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GABRA2 essentiels à la fonction de GABAA Rα2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GABRA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GABAA Rα2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GABAA Rα2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GABRA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GABAA Rα2 plasmide HDR (h) et le GABAA Rα2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GABRA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GABRA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.