G6PT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406483-ACT

O SLC37A4 humano codifica o transportador de glicose-6-fosfato (G6PT), uma proteína de membrana do retículo endoplasmático (RE) que importa glicose-6-fosfato para o lúmen do RE, sustentando a atividade da glicose-6-fosfatase e a homeostase metabólica. Essa etapa de transporte é central na glicogenólise e na gliconeogênese, conectando o fluxo de carboidratos no citosol ao manejo de fosfato localizado no RE e às vias de produção de glicose. A função do G6PT influencia o equilíbrio energético intracelular e as respostas celulares à disponibilidade de nutrientes, com efeitos a jusante sobre o metabolismo de neutrófilos e hepático. Variantes patogênicas de SLC37A4 estão associadas à doença de armazenamento de glicogênio tipo Ib, tornando esse locus relevante para estudos mecanísticos de desregulação metabólica e fenótipos relacionados ao sistema imune.

G6PT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC37A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G6PT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC37A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC37A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G6PT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC37A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G6PT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G6PT em células tumorais com expressão de SLC37A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.