Plasmide CRISPR/Cas9 KO G3BP1 (m): sc-424175

Présentation

G3bp1 code pour G3BP1, une protéine liant l’ARN qui amorce l’assemblage des granules de stress et coordonne le tri des ARNm lors d’un stress cellulaire. Par ses interactions avec des facteurs d’initiation de la traduction et des composants de signalisation, G3BP1 relie les réponses au stress à des voies qui régulent la stabilité des ARNm, la signalisation de l’immunité innée et l’apoptose, notamment via des interactions avec les programmes associés aux MAPK et aux interférons. Dans les systèmes murins, G3BP1 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la restriction antivirale et la modulation de la signalisation inflammatoire, ainsi que pour des effets plus larges sur la protéostasie et les décisions de destinée cellulaire. Une dynamique dérégulée des granules de stress impliquant G3BP1 a été associée à des phénotypes de neurodégénérescence et liés au cancer dans des modèles expérimentaux, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche sur les mécanismes des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO G3BP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène G3bp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du G3bp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert G3bp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine G3BP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en G3bp1 pour l'étude de la signalisation de G3BP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de G3bp1 essentiels à la fonction de G3BP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de G3bp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le G3BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le G3BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus G3bp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le G3BP1 plasmide HDR (m) et le G3BP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie G3bp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles G3bp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.