Plasmide CRISPR d'Activation (h) G3BP1: sc-400745-ACT

La protéine humaine G3BP1 (G3BP stress granule assembly factor 1) est une protéine liant l’ARN qui initie la formation des granules de stress et coordonne le tri des ARNm lors du stress cellulaire. Elle intègre des signaux issus du contrôle de la traduction et des voies de l’immunité innée en régulant la stabilité des ARNm, l’initiation de la traduction et le remodelage des ribonucléoprotéines, avec des effets en aval sur l’apoptose, les réponses antivirales et les programmes du cycle cellulaire. G3BP1 participe à des processus d’adaptation au stress associés à l’arrêt de la traduction médié par eIF2α, à la signalisation MAPK et au métabolisme de l’ARN, et sa dérégulation a été associée à une tolérance au stress altérée et à une prolifération aberrante dans plusieurs contextes pathologiques. Parce que G3BP1 couple le traitement de l’ARN à une signalisation sensible au stress, elle est largement étudiée dans des modèles de biologie tumorale, de neurodégénérescence et d’interactions hôte–pathogène.

G3BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de G3BP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G3BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus G3BP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription G3BP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G3BP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus G3BP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G3BP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G3BP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de G3BP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.