Plasmide Double Nickase (h) Furin: sc-400904-NIC

FURIN code la furine, une proprotéine convertase dépendante du calcium, principalement localisée au niveau du réseau trans-Golgi et des compartiments endosomaux, où elle clive des protéines précurseurs sur des motifs multibasiques afin de générer des facteurs matures bioactifs. Grâce à cette activité de maturation, la furine régule la maturation, dans la voie de sécrétion, des hormones, facteurs de croissance, cytokines, récepteurs et enzymes de modification de la matrice extracellulaire, influençant des voies liées à la signalisation cellulaire, à l’adhérence et au remodelage tissulaire. La fonction de FURIN est intégrée au trafic vésiculaire et à la protéostasie, et une activité de la furine altérée a été associée à une dérégulation de la signalisation inflammatoire, à la progression oncogénique et à des mécanismes d’entrée ou de dissémination de pathogènes dans les cellules hôtes. En tant que nœud central du traitement des proprotéines, la furine est fréquemment étudiée pour préciser comment la maturation protéolytique contrôle le comportement des réseaux de signalisation en aval dans des modèles de cellules humaines.

Furin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FURIN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FURIN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FURIN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FURIN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.