FucT-IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401795

Übersicht

FUT4 kodiert die im Golgi-Apparat lokalisierte α1,3‑Fucosyltransferase FucT‑IV, ein Enzym, das Fucose auf N‑Acetyllactosamin‑Akzeptoren überträgt und so fucosylierte Glykanepitope wie Lewis‑X‑ähnliche Strukturen auf Glykoproteinen und Glykolipiden erzeugt. Durch die Ausprägung der Zelloberflächen‑Glykosylierung beeinflusst FucT‑IV die selektinvermittelte Adhäsion, das Leukozyten‑Trafficking sowie allgemein glykanabhängige Signalprozesse und Rezeptordynamiken. Die FUT4‑Aktivität greift in Fucose‑Stoffwechsel und Glykosylierungswege ein, die Immunzell‑Interaktionen, Entzündungsreaktionen und Zellmigration regulieren. Eine fehlregulierte FUT4‑Expression und veränderte Fucosylierungsmuster wurden in der Literatur mit invasivem Tumorzellverhalten, metastaseassoziierten Adhäsionsphänotypen und Veränderungen der Interaktionen im Immunmikromilieu in Verbindung gebracht, was FUT4 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur glykanvermittelten Biologie macht.

Das FucT-IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FUT4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FUT4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FUT4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FucT-IV-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FUT4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FucT-IV-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FUT4-Exone abzielen, die für die FucT-IV-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FUT4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FucT-IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FucT-IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FUT4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FucT-IV HDR-Plasmid (h) und FucT-IV HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FUT4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FUT4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.