Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRP-3: sc-402504-ACT

Le gène humain **FRZB** code la **protéine 3 apparentée à Frizzled (FRP-3)**, un antagoniste sécrété des ligands Wnt qui module l’activation des récepteurs Frizzled et la transcription en aval dépendante de la **β-caténine**. En façonnant les gradients Wnt, FRP-3 influence les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et l’homéostasie de la matrice extracellulaire au cours du développement et dans les tissus adultes, notamment le cartilage et le tissu conjonctif. Une expression ou une fonction altérée de FRZB a été associée à une dérégulation de la signalisation Wnt dans la biologie musculosquelettique et des voies liées aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur l’arthrose, le développement squelettique et le comportement des cellules cancéreuses. L’activité de FRP-3 s’inscrit également dans les interactions (crosstalk) avec les voies **BMP/TGF-β** et les programmes de remodelage matriciel qui influencent l’organisation et la différenciation tissulaires.

FRP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FRZB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FRZB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FRZB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FRZB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de FRZB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.