FPR2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401738-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FPR2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FPR2 Double-Nickase-Plasmid (h) und FPR2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FPR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FPR2: sc-57141
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FPR2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FPR2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Formylpeptidrezeptor 2 (FPR2) ist ein humaner G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor, der N‑formylierte Peptide und verschiedene Lipidmediatoren erkennt und extrazelluläre Chemoattraktantensignale mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft. Nach Aktivierung nutzt er Gi‑abhängige Signalwege, die die Kalziummobilisierung, MAPK‑Kaskaden, PI3K‑Signalgebung und β‑Arrestin‑assoziierte Prozesse regulieren, und prägt damit Leukozytenchemotaxis, Degranulation, Zytokinproduktion und die Aktivierung von Phagozyten. FPR2 ist an der angeborenen Immunüberwachung und an der Auflösung von Entzündungen über ligandenvoreingenommene (biased) Signalgebung beteiligt und integriert proinflammatorische sowie proauflösende Programme. Eine fehlregulierte FPR2‑Signalgebung wurde mit chronisch entzündlichen Erkrankungen, infektionsassoziierten Immunantworten und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht, was FPR2 zu einem geeigneten Knotenpunkt macht, um das Verhalten myeloider Zellen und das Zusammenspiel entzündlicher Signalwege zu untersuchen.
FPR2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FPR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FPR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FPR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FPR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.