Plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXL2 (h): sc-403351

Présentation

FOXL2 est un facteur de transcription de la famille forkhead box qui joue un rôle central dans la différenciation des cellules de la granulosa, la folliculogenèse ovarienne et le maintien de l’identité ovarienne. En se liant à des éléments cis‑régulateurs et en coordonnant des programmes transcriptionnels associés à la chromatine, FOXL2 intègre des signaux qui façonnent la stéroïdogenèse, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose dans les tissus reproducteurs. Une activité dérégulée de FOXL2 perturbe les réseaux géniques du développement et est fortement associée aux troubles du développement sexuel et à la pathobiologie ovarienne, notamment aux altérations somatiques récurrentes observées dans les tumeurs des cellules de la granulosa de type adulte. En tant que régulateur nucléaire aux fonctions déterminantes de lignée, FOXL2 est largement étudié dans les voies impliquées en endocrinologie de la reproduction, en régulation transcriptionnelle et en biologie tumorale spécifique des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXL2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOXL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOXL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOXL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FOXL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOXL2 pour l'étude de la signalisation de FOXL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOXL2 essentiels à la fonction de FOXL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOXL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FOXL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FOXL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOXL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FOXL2 plasmide HDR (h) et le FOXL2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOXL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOXL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.