Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXC1: sc-403113-ACT

FOXC1 (forkhead box C1) est un facteur de transcription à hélice ailée (winged-helix) qui régule des programmes géniques contrôlant la mise en place des structures embryonnaires, le développement de la crête neurale et du mésenchyme périoculaire, ainsi que la spécification vasculaire et lymphatique. Il agit comme un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence et intègre des signaux développementaux, notamment les réseaux transcriptionnels associés à TGF-β/BMP et à Wnt, afin d’influencer les décisions de destin cellulaire, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée ou des mutations de FOXC1 sont fortement liées aux troubles de dysgénésie du segment antérieur, tels que le spectre d’Axenfeld–Rieger et le glaucome congénital, et une activité aberrante de FOXC1 a été associée à des altérations de la différenciation et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes de cancer. En tant que régulateur transcriptionnel nodal, FOXC1 est largement utilisé pour étudier l’engagement de lignée, des programmes de type transition épithélio-mésenchymateuse, et les circuits de régulation génique dans des modèles de développement et de maladie.

FOXC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.