Fos B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400306-ACT

Das humane Gen **FOSB** kodiert **FosB**, einen bZIP-Transkriptionsfaktor der AP‑1-Familie, der mit JUN-Proteinen Heterodimere bildet, um stimulusabhängige Genexpressionsprogramme zu regulieren. FosB wird rasch durch Wachstumsfaktoren, Zytokine und neuronale Aktivität induziert und verknüpft so extrazelluläre Signale mit der transkriptionellen Steuerung von Proliferation, Differenzierung, Stressantworten und synaptischer Plastizität. Seine Aktivität ist in MAPK/ERK- und Immediate‑Early‑Gen-Netzwerke eingebettet und prägt nachgeschaltete Signalwege, die an Entzündung und zellulärer Anpassung beteiligt sind. Eine fehlregulierte FOSB-Signalgebung wurde mit veränderten neuronalen und immunologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und im Kontext krebsassoziierter transkriptioneller Umprogrammierung sowie neuropsychiatrischer Krankheitsmechanismen untersucht.

Fos B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOSB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fos B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOSB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOSB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fos B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOSB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fos B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fos B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOSB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.