Plasmide CRISPR d'Activation (h) folliculin: sc-403316-ACT

Le gène humain **FLCN** code la folliculine, une protéine associée à la suppression tumorale qui agit comme protéine d’activation des GTPases (GAP) pour RagC/D et contribue à coupler la détection des acides aminés à la signalisation **mTORC1** au niveau des lysosomes. La folliculine participe à l’homéostasie énergétique et nutritionnelle via ses interactions avec **FNIP1/2** et **AMPK**, influençant l’autophagie, la biogenèse lysosomale et le métabolisme mitochondrial. La perturbation de **FLCN** dérègle des programmes cellulaires épithéliaux et stromaux liés à la prolifération et à la différenciation, et des variants germinaux sont associés au syndrome de **Birt–Hogg–Dubé**, caractérisé par des atteintes rénales et pulmonaires. Parce que la folliculine intègre des signaux métaboliques et de réponse au stress, elle est largement étudiée dans les voies qui régissent le contrôle de la croissance cellulaire et l’homéostasie tissulaire.

folliculin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FLCN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

folliculin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FLCN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FLCN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de folliculin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FLCN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de folliculin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie folliculin dans les cellules tumorales présentant une expression de FLCN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.