Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOG-2: sc-401361-ACT

ZFPM2 code la protéine « friend of GATA-2 » (FOG-2), un corégulateur transcriptionnel multi-doigts de zinc qui se lie aux facteurs de la famille GATA afin de façonner des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Dans les cellules humaines, FOG-2 module l’activation et la répression transcriptionnelles en se coordonnant avec des complexes de remodelage de la chromatine et des complexes corépresseurs, influençant ainsi les voies du développement et de la différenciation. Cet axe de régulation est impliqué dans l’organogenèse et la spécification du destin cellulaire, et une activité altérée de ZFPM2/FOG-2 est associée à des réseaux transcriptionnels déréglés dans des contextes pathologiques pertinents, tels que les cardiopathies congénitales et la biologie tumorale. En tant que cofacteur nodal des circuits pilotés par GATA, FOG-2 est fréquemment étudiée pour comprendre comment les partenariats entre facteurs de transcription ajustent l’état épigénétique et les sorties de signalisation en aval.

FOG-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZFPM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOG-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZFPM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZFPM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOG-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZFPM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOG-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOG-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZFPM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.