Plasmide Double Nickase (h) Flt-3/Flk-2: sc-400218-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Flt-3/Flk-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Flt-3/Flk-2 Double Nickase (h) et le plasmide Flt-3/Flk-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FLT3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Flt-3/Flk-2 Antibody (SF1.340): sc-19635
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Flt-3/Flk-2 | sc-400218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Flt-3/Flk-2 | sc-400218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLT3 (Flt-3/Flk-2) code une tyrosine kinase réceptrice de classe III exprimée principalement dans les progéniteurs hématopoïétiques, où la dimérisation induite par le ligand déclenche l’autophosphorylation et la signalisation en aval. FLT3 activé engage les voies PI3K–AKT, RAS–MAPK et JAK–STAT afin de réguler la prolifération, la survie et la différenciation au cours de l’hématopoïèse précoce et du développement des cellules dendritiques. Une signalisation FLT3 dérégulée, incluant une activation aberrante et une expression altérée, est fortement liée à la biologie des hémopathies myéloïdes et aux phénotypes des cellules souches/progénitrices leucémiques, ce qui en fait une cible largement étudiée au sein des réseaux de signalisation oncogénique. FLT3 sert également de récepteur modèle pour étudier le trafic des RTK, le contrôle par rétroaction et les interactions entre voies (cross-talk) dans des contextes dépendants des cytokines.
Flt-3/Flk-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLT3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.