FLAD1 Plasmide Double Nickase (m): sc-435691-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FLAD1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FLAD1 Double Nickase Plasmid (m) e il FLAD1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Flad1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FLAD1 Antibody (G-4): sc-376819
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FLAD1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435691-NIC | 20 µg | $410.00 |
Flad1 codifica la flavina adenina dinucleotide sintetasi 1 (FLAD1), un enzima chiave che converte FMN in FAD, controllando così il pool cellulare di questo essenziale cofattore redox. Regolando le ossidoreduttasi FAD-dipendenti, FLAD1 sostiene il metabolismo mitocondriale e perossisomiale, la fosforilazione ossidativa e, più in generale, le vie mediate da flavoproteine che influenzano l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Alterazioni nella biosintesi dei cofattori flavinici sono associate a difetti del metabolismo energetico e delle risposte cellulari allo stress, rendendo Flad1 un nodo rilevante per lo studio della vulnerabilità metabolica e degli squilibri redox. Nei sistemi murini, la perturbazione di Flad1 offre un approccio pratico per interrogare il signaling dipendente dai cofattori e le reti enzimatiche nei diversi tessuti.
FLAD1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Flad1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Flad1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Flad1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Flad1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.