FKHR/FOXO1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400137-LAC

FOXO1 (FKHR) è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che integra la segnalazione insulinica/IGF-1 con programmi cellulari che controllano il metabolismo, le risposte allo stress ossidativo, l’autofagia e la regolazione del ciclo cellulare. La sua attività è strettamente regolata dalla fosforilazione mediata da PI3K–AKT e dallo shuttling nucleo-citoplasmatico, collegando lo stato nutrizionale al controllo trascrizionale di geni gluconeogenici, apoptotici e associati alla differenziazione. FOXO1 interagisce inoltre con le vie TGF-β, Wnt/β-catenina e MAPK per modellare le decisioni di destino cellulare e l’adattamento allo stress. Una segnalazione di FOXO1 deregolata è stata implicata in disfunzioni metaboliche e processi oncogenici, inclusi contesti in cui output trascrizionali alterati di FOXO1 influenzano proliferazione, sopravvivenza e omeostasi delle cellule immunitarie.

Le particelle di attivazione lentivirale FKHR/FOXO1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXO1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FKHR/FOXO1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXO1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FKHR/FOXO1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXO1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.