Plasmide CRISPR d'Activation (h) FKBPL: sc-410504-ACT

FKBPL (FK506 binding protein like) code une co‑chaperonne apparentée aux immunophilines, associée aux complexes HSP90, qui contribue à la protéostasie et à la signalisation des récepteurs aux stéroïdes. Elle a été associée à la régulation de la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress cellulaire et à la modulation de la stabilité des protéines au sein de voies influençant la prolifération et la différenciation. Dans les cellules humaines, l’activité de FKBPL a été étudiée dans des contextes impliquant la signalisation angiogénique et des signaux inflammatoires, avec des liens rapportés avec la biologie tumorale et le remodelage vasculaire. Des altérations de l’expression de FKBPL ont été observées dans divers modèles pertinents pour les maladies, étayant son utilisation comme nœud mécanistique dans des études portant sur l’adaptation des voies de signalisation et la régulation par le microenvironnement.

FKBPL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FKBPL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FKBPL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FKBPL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FKBPL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FKBPL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FKBPL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FKBPL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FKBPL dans les cellules tumorales présentant une expression de FKBPL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.