Plasmide Double Nickase (m) FKBP51: sc-420365-NIC

Fkbp5 code pour FKBP51, un co-chaperon immunophiline qui se lie à HSP90 et module les complexes des récepteurs stéroïdiens, notamment les récepteurs des glucocorticoïdes et de la progestérone, influençant ainsi la sensibilité des récepteurs et la régulation par rétrocontrôle. FKBP51 intervient également dans la signalisation de la réponse au stress en modulant l’activité d’AKT/PHLPP et les programmes inflammatoires liés à NF-κB, reliant la protéostasie au contrôle transcriptionnel. Dans les modèles murins, une expression altérée de Fkbp5 a été associée à une dérégulation de la signalisation de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien, de l’homéostasie métabolique et des processus neuro-immuns. Ces fonctions font de FKBP51 un nœud utile pour disséquer les voies qui couplent la machinerie des chaperons à des phénotypes endocriniens et d’adaptation au stress in vivo et en cellules cultivées.

FKBP51 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fkbp5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fkbp5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fkbp5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fkbp5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.