Plasmide Double Nickase (h) FKBP51: sc-401560-NIC

FKBP5 code l’immunophiline FKBP51, une isomérase peptidyl-prolyl cis-trans qui agit comme co‑chaperon de HSP90 et module la signalisation des récepteurs aux hormones stéroïdiennes, notamment au sein des complexes des récepteurs des glucocorticoïdes, des androgènes et de la progestérone. Par ses interactions avec les complexes récepteurs et des intermédiaires de signalisation, FKBP51 influence des programmes transcriptionnels sensibles au stress et s’intègre à des voies telles que MAPK et NF‑κB, qui façonnent l’inflammation et la survie cellulaire. FKBP51 affecte également la protéostase et des processus liés à l’autophagie en régulant le repliement des protéines et le trafic des récepteurs. Une expression altérée de FKBP5 ou des variations de sa régulation ont été associées à une dérégulation des réponses au stress ainsi qu’à la biologie de maladies neuropsychiatriques et inflammatoires, ce qui en fait une cible largement étudiée du dialogue croisé entre les systèmes endocrinien et immunitaire.

FKBP51 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FKBP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FKBP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FKBP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FKBP5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.