Plasmide Double Nickase (h) Filamin 3: sc-402897-NIC

FLNB code la filamine 3, une protéine d’échafaudage se liant à l’actine qui réticule la F‑actine et organise l’architecture du cytosquelette cortical afin de coordonner la forme cellulaire, la polarité et la stabilité mécanique. La filamine 3 soutient l’adhésion dépendante des intégrines, l’agrégation des récepteurs et la mécanotransduction en couplant des protéines membranaires au réseau d’actine et en modulant la signalisation des GTPases de la famille Rho, influençant ainsi la migration et le remodelage tissulaire. En biologie humaine, la perturbation de la fonction de la famille des filamines est associée à une dynamique du cytosquelette altérée et à des défauts du développement squelettique, et des variations de FLNB sont liées à des phénotypes de dysplasie squelettique héréditaire. Ces propriétés font de FLNB une cible utile pour étudier la signalisation dépendante des forces, le dialogue cytosquelette–MEC (matrice extracellulaire) et des programmes morphogénétiques régulés au cours du développement.

Filamin 3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLNB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLNB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLNB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLNB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.