Plasmide Double Nickase (h) Fibrinogen β: sc-401819-NIC

FGB code la chaîne bêta du fibrinogène, un composant essentiel de l’hexamère de fibrinogène (chaînes Aα, Bβ et γ), principalement sécrété par les hépatocytes et clivé par la thrombine durant la phase terminale de la cascade de coagulation. Après activation, les monomères de fibrine polymérisent et sont réticulés par le facteur XIII pour former un caillot de fibrine stable, reliant l’hémostase à la réparation tissulaire et au remodelage de la matrice extracellulaire. Le fibrinogène et la fibrine interagissent également avec des récepteurs plaquettaires (p. ex. l’intégrine αIIbβ3) et modulent la signalisation inflammatoire, influençant le recrutement des leucocytes et la biologie vasculaire. Une expression altérée de FGB ou des variations de séquence sont associées à des anomalies quantitatives ou qualitatives du fibrinogène et contribuent à une formation de caillot dysrégulée, offrant un point d’entrée mécanistique pour l’étude de la thrombose, des phénotypes hémorragiques et des dysfonctions vasculaires liées à l’inflammation.

Fibrinogen β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.