FEZ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404727-ACT

LZTS1 (também conhecido como FEZ1) codifica um supressor tumoral com motivo leucine zipper que contribui para a regulação da progressão do ciclo celular e para a manutenção da estabilidade genômica. O FEZ1 tem sido associado a processos ligados a microtúbulos e ao centrossomo e pode influenciar o controle de checkpoints e a proliferação por meio de interações com a maquinaria regulatória da mitose. A redução da expressão ou a perda de LZTS1 foi relatada em diversos cânceres humanos, onde se associa a crescimento desregulado e a alterações no controle do ciclo celular. Essas características fazem do FEZ1 um modelo útil para estudar vias de supressores tumorais, a fidelidade mitótica e a regulação transcricional dependente do contexto em células humanas.

FEZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LZTS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FEZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LZTS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LZTS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FEZ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LZTS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FEZ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FEZ1 em células tumorais com expressão de LZTS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.