Plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin heavy chain (h): sc-418152

Présentation

FTH1 code la chaîne lourde de la ferritine, une sous-unité catalytique du complexe ferritine qui oxyde Fe2+ en Fe3+ et permet un stockage intracellulaire sûr du fer. En tamponnant le fer labile et en limitant la formation d’espèces réactives de l’oxygène induite par le fer, FTH1 contribue à l’homéostasie redox, à la fonction mitochondriale et à la protection contre les dommages oxydatifs. La dynamique de la ferritine s’articule avec les voies d’entrée et d’export du fer, notamment l’endocytose médiée par le récepteur de la transferrine et l’efflux dépendant de la ferroportine, modulant les réponses cellulaires à l’hypoxie, à l’inflammation et au stress métabolique. Une expression dérégulée de FTH1 ou un métabolisme altéré de la ferritine sont fréquemment étudiés dans des contextes de surcharge en fer, de neurodégénérescence, d’inflammation associée aux infections et de biologie tumorale, où la disponibilité du fer influence la prolifération et les programmes de mort cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin heavy chain (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FTH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FTH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FTH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ferritin heavy chain.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FTH1 pour l'étude de la signalisation de ferritin heavy chain, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FTH1 essentiels à la fonction de ferritin heavy chain
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FTH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ferritin heavy chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ferritin heavy chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FTH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ferritin heavy chain plasmide HDR (h) et le ferritin heavy chain (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FTH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FTH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.