Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plasmide Double Nickase (h) Fe65: sc-403226-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Fe65 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Fe65 Double Nickase (h) et le plasmide Fe65 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant APBB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Fe65 Antibody (F-6): sc-398389
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Fe65 | sc-403226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Fe65 | sc-403226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBB1 code Fe65, une protéine adaptatrice qui se lie à la queue cytoplasmique de la protéine précurseur de l’amyloïde (APP) via ses domaines de liaison aux phosphotyrosines (PTB) et coordonne des complexes multiprotéiques impliqués dans la signalisation neuronale. Fe65 participe au trafic endocytique, à la fonction synaptique et à la régulation de l’expression génique grâce à ses interactions avec la machinerie de maturation d’APP et des co-régulateurs nucléaires. Ces activités relient APBB1 à des voies contrôlant le clivage d’APP, la signalisation intracellulaire et la transcription dépendante de l’activité. Des altérations des interactions Fe65–APP et de la signalisation en aval ont été étudiées dans le contexte de la neurodégénérescence et de la maturation amyloïdogène, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles mécanistiques de la maladie d’Alzheimer et de neuropathologies apparentées.
Fe65 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus APBB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de APBB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de APBB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de APBB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.