Plasmide Double Nickase (m) FcRn: sc-420308-NIC

Le gène murin *Fcgrt* code le récepteur Fc néonatal (FcRn), une molécule apparentée aux CMH de classe I qui se lie aux IgG et à l’albumine de manière dépendante du pH afin de réguler leur trafic intracellulaire et leur demi-vie systémique. FcRn joue un rôle majeur dans les voies de tri et de recyclage endosomaux, en limitant la dégradation lysosomale et en favorisant la transcytose à travers les épithéliums et endothéliums polarisés. Par ces mécanismes, FcRn influence l’immunité humorale, la gestion des antigènes et la distribution tissulaire des immunoglobulines, avec des implications pour les mécanismes inflammatoires et auto-immuns liés à l’homéostasie des IgG. Une activité dérégulée de FcRn a été associée à des modifications de la persistance des IgG et de la biologie des complexes immuns, faisant de *Fcgrt* une cible pertinente pour étudier la régulation immunitaire dépendante des Fc dans des modèles murins.

FcRn Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fcgrt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fcgrt. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fcgrt. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fcgrt.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.