Fascin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402535-ACT

FSCN1 kodiert Fascin 1, ein Aktin-bündelndes Protein, das parallele Filamentanordnungen in Filopodien, Lamellipodien und anderen protrusiven Strukturen organisiert, die Zellformveränderungen und gerichtete Migration unterstützen. Durch die Regulation des Zytoskelett-Remodelings und der Adhäsionsdynamik trägt Fascin 1 zu Prozessen wie Motilität, invasionsähnlichem Verhalten und Mechanotransduktion bei, indem es sich in Rho-GTPase-Signale und Aktinpolymerisationswege integriert. Eine veränderte FSCN1-Expression wurde in zahlreichen Krebs- und Entzündungskontexten beschrieben und ist häufig mit verstärkten Migrationsphänotypen und metastatischem Potenzial assoziiert. Diese Eigenschaften machen FSCN1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Zytoskelettregulation, von Zell–Matrix-Interaktionen und von Transkriptionsprogrammen, die mit der epithelial-mesenchymalen Transition verbunden sind.

Fascin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FSCN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fascin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FSCN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FSCN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fascin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FSCN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fascin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fascin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FSCN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.