Plasmide Double Nickase (h) FANCI: sc-402229-NIC

FANCI code un composant central de la voie de réparation de l’ADN de l’anémie de Fanconi (FA), qui préserve la stabilité du génome pendant la réplication de l’ADN. En cas de stress réplicatif ou de lésions de type pontage interbrin, FANCI forme un hétérodimère avec FANCD2 et subit une monoubiquitination, ce qui favorise le recrutement de facteurs de réparation en aval impliqués dans un traitement nucléolytique coordonné, la synthèse translésionnelle et la recombinaison homologue. Par ces fonctions, FANCI contribue à la protection des fourches de réplication bloquées, à la signalisation du point de contrôle de la phase S et à la suppression des aberrations chromosomiques. L’altération des gènes de la voie FA, dont FANCI, est associée à l’anémie de Fanconi et, plus largement, à des défauts de réparation de l’ADN pertinents en oncologie, ce qui fait de FANCI un nœud utile pour étudier les mécanismes d’instabilité génomique.

FANCI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FANCI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FANCI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FANCI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FANCI.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.